Polimorfismos nucleotidicos de genes envolvidos nas características químicas do grão de café. Complementaridade das estratégias in silico e in vivo.

A compreensão das bases genéticas da composição química do grão de café é indispensável para a gestão dos programas de melhoramento que têm como objetivo a qualidade da bebida. O desenvolvimento da genômica permite hoje a identificação de genes candidatos que são potencialmente envolvidos nessas características. Entretanto, a utilização destas novas ferramentas para o melhoramento depende da capacidade de identificar dentro de todos esses candidatos,, os que controlam a variabilidade das características entre genótipos. Essa identificação envolve o teste das relações entre os polimorfismos dos genes e a variabilidade fenotípica. A avaliação da diversidade nucleotídica pode ser feita de duas maneiras: usando as informações disponíveis nos bancos de dados EST (estratégia in silico) ou por seqüênciamento direto de genótipos de interesse (estratégia in vivo). O objetivo desse estudo foi avaliar o potencial da estratégia de analise de polimorfismos in silico para o café baseado nos bancos de dados disponíveis. Foram estudadas as vias da biossíntese da sacarose e dos diterpenos, compostos com efeitos na qualidade da bebida e na saúde humana, respectivamente. Essa busca permitiu a identificação de 1.1 polimorfismos para cada 100 bp para os 14 genes estudados. Uma avaliação da diversidade nucleotídica in vivo para alguns desses genes (via da biossíntese da sacarose) permitiu comparar essas duas estratégias. A estratégia in silico é complementar à estratégia in vivo permitindo uma avaliação geral dos níveis de polimorfismos dos genes numa larga escala em todo o genoma com um baixo custo

Construction and characterization of a Coffea canephora BAC library to study the organization of sucrose biosynthesis genes

Corresponding author: E-mail: [email protected] audienceThe first bacterial artificial chromosome (BAC) library of Robusta coffee (Coffea canephora) was constructed, with the aim of developing molecular resources to study the genome structure and evolution of this perennial crop. Clone 126, which is highly productiveand confers good technological and organoleptic qualities of beverage, was chosen for development of this library. The BAC library contains 55,296 clones, with an average insert size of 135 Kb per plasmid, therefore representing theoretically nine haploid genome equivalents of C. canephora. Its validation was achieved with a set of 13 genetically anchored single-copy and 4 duplicated RFLP probes and yielded on average 9 BAC clones per probe. Screening of this BAC library was also carried out with partial cDNA probes coding for enzymes of sugar metabolism like invertases and sucrose synthase, with the aim of characterizing the organization and promoter structure of this important class of genes. It was shown that genes for both cell wall and vacuolar forms of invertases were probably unique in the Robusta genome whereas sucrose synthase was encoded by at least two genes. One of them (CcSUS1) was cloned and sequenced, showing that our BAC library is a valuable tool to rapidly identify genes of agronomic interest or linked to cup quality in C. canephora